产品名称:ToneScript cDNA **链合成试剂盒 英文名称:First-Strand cDNA Synthesis Kit 产品描述:ToneScript cDNA**链合成试剂盒是专门用于两步法RT-PCR的第一步,含有合成高质量**链cDNA所需的所有成分,适用于后续的PCR、qPCR以及基因克隆。采用的是无RNase H活性的M-MLV逆转录酶,避免了**链cDNA合成过程中RNA/DNA杂交体中RNA被降解,具有高效的逆转录活性,适合合成长达9 k的cDNA片段。 产品编号 产品规格 价格 TK08013 50次量 ¥750 TK08015 200次量 ???¥1350 产品特点:优化配制了用于**链cDNA合成反应的各种成分,试剂盒中的ToneScript M-MLV具有高效的逆转录活性,避免了**链cDNA合成过程中RNA/DNA杂交体中RNA被降解,具有高效的逆转录活性。适合后续的PCR、定量PCR以及PCR克隆,适用于各种PCR耐热聚合酶。 应用举例:反转录性 常见问题解析: 1、 没有RT-PCR产物或产量低 ◆RNA模板降解。RNA 的纯度和完整对于反转录得到全长cDNA是非常重要的。提取的RNA应进行电泳检测以确定其是否降解。同时RNA要避免多次反复冻融。 ◆RNA模板纯度低。提取RNA的过程中,可能残留一些盐离子、试剂,如 EDTA、、胍盐、盐、多胺等抑制接下来的反转录反应。建议用75%(DEPC 水配制)仔细清洗RNA沉淀。 ◆引物不合适。选择合适的引物,当RNA是细菌RNA或者是没有polyA尾的RNA要选择随机引物或者特异引物。 ◆目的基因含有复杂二级结构或高GC含量。建议选择随机引物进行反转录。将反转录温度提高至55℃。 2、RT-PCR 产物比预期长 ◆RNA 中很可能污染了DNA。真核生物基因组DNA中含有内含子,可能参与了 PCR扩增,可以在反转录之前对RNA进行DNaseI的消化。 3、阴性对照中有RT-PCR产物 ◆阴性对照中有RT-PCR产物也表明有DNA的污染。在反转录之前对RNA进行DNase I 的消化。